DB35/T 1233—2011 测定待测菌种3次，每次3个重复，若萌发时间或生长速度比正常菌种延长2倍以上，判定待测菌种 活力减弱。 4.5.2 搔菌法检测 4.5.2

DB35/T 1233—2011 

                     食用菌菌种活力检测技术规范 

1  范围 

   本标准规定了食用菌菌种活力检测技术规范的感官评定、细胞核数量检测、温度胁迫萌发检测、菌
丝再生能力检测评价食用菌菌种活力的方法。 
   本标准适用于香菇、毛木耳、黑木耳、金针菇、杏鲍菇、真姬菇、双孢蘑菇、草菇、鸡腿菇的母种、
原种和栽培种。 

2  规范性引用文件 

    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 
   GB/T 12728-2006 食用菌术语 
   GB/T 19171 双孢蘑菇菌种 
   GB/T 23599  草菇菌种 
   NY/T 1846-2010 食用菌菌种检验规程 

3  术语和定义 

    下列术语和定义适用于本标准。 

3.1   

    菌种活力 

    菌种的生长、繁殖能力。 

3.2   

    高温胁迫  

   过高温度对生物体所处的生存状态产生的生理机能代谢下降。 

3.3   

   插片法 

   采用平皿培养菌丝，在菌丝还未萌发时将灭菌的盖玻片与培养基表面成30度角倾斜插入离菌种块约
1cm处的培养基中，待菌丝生长至盖玻片约1/3处时，拔出盖玻片，反面放置载玻片上观察，从而获得可
以在显微镜上观察菌丝生长脉络的一种真菌菌丝显微制片方法。 

3.4   

    高温抑制线 
DB35/T 1233—2011 

    食用菌菌种在生产过程中受高温的不良影响，培养物部分区域呈现发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象
与正常菌丝出现的明显界线。

3.5   

    壁料分离 

    菌种培养基因收缩而导致与试管壁、菌种瓶、塑料袋等容器壁分开的现象。

3.6   

    最高温度 

    食（药）用菌生长发育温度范围的上限。 

4  方法与步骤 

4.1  抽样 

    按“NY/T 1846-2010”中5.1和5.2进行抽样。 

4.2  感官评定 

4.2.1  母种 

    母种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： 
    a) 斜面培养基干缩，出现质壁分离； 
    b) 菌丝明显变色或出现暗斑。 

4.2.2  原种与栽培种 

    原种与栽培种出现下列情况之一，判定菌种活力已减弱： 
    a) 菌丝明显变色，菌种变软、大量吐黄水； 
    b) 出现壁料分离； 
    c) 产生高温抑制线； 
    d) 菌种明显失水变轻。 

4.3  细胞核数量检测 

4.3.1  适宜的食用菌品种 

    本检测适用于草菇。 

4.3.2  细胞核数量测定 

    采用插片法培养获取待观察菌丝。无菌条件下，在距待测母种接种块1cm～2cm处，原种或栽培种的
中央位置，挑取大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌丝块，转接至平板PDA培养基中央（当待测菌种为母种
时，接种块的菌丝面朝上），于菌种最适宜的温度下培养。 
    取出带菌丝的盖玻片，滴一滴DAPI（4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐）染料至载玻片中，并反向盖
上带菌丝的盖玻片，荧光显微镜下随机选取50个视野观察，每个视野随机选1个完整细胞进行细胞核数
量测定，并做好记录。  

  2 
                                                              DB35/T 1233—2011 

4.3.3  活力评价 

4.3.3.1  测定正常菌种菌丝细胞的平均细胞核数量，作为参考系。 
4.3.3.2  重复计数 3次，并与正常菌种进行统计分析，如待测菌种菌丝细胞的平均细胞核数量显著低
于正常菌种，说明该菌种活力减弱。 

4.4  高温胁迫萌发检测 

4.4.1  处理温度的设定 

    处理温度等于最高温度减去2℃。 

4.4.2  实验步骤 

4.4.2.1  取待测菌种，挑取大小约 0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌丝块，转接至 PDA平板培养基中央，于
处理温度下放置 1 个小时。 

4.4.2.2  待测菌种取样位置，母种为距接种块 1cm～2cm处，原种或栽培种为菌种瓶的中央位置，若待
测菌种为母种，接种块的菌丝面朝上。 

4.4.2.3  将处理好的平皿放置菌株最适培养温度培养，每隔 2 小时～3 小时观察一次。 

4.4.3  活力评价 

   测定待测菌种3次，每次3个重复，若萌发时间比正常菌种延长2倍以上，判定待测菌种活力减弱。 

4.5  菌丝再生能力检测 

4.5.1  栽培基质中菌丝再生能力检测 

4.5.1.1  培养基 

4.5.1.1.1  木生菌 

   杂木屑（细）78％、麦麸 20％、糖1％、石膏 1%，含水量 58%-62%，pH 值自然。 

4.5.1.1.2  草生菌 

   草菇培养基按“GB/T 23599—2009”中 A.2.2的草菇培养基配方，双孢蘑菇的按照“GB 19171—2003” 
中B.2.1的双孢蘑菇培养基配方。 

4.5.1.2  实验步骤 

4.5.1.2.1  取待测菌种，挑取大小约 0.5cm×0.5cm×0.5cm的菌丝块，转接至装培养料试管上表面中
央，于最适的温度下培养。 

4.5.1.2.2  按本标准 4.4.2.2 进行。 

4.5.1.2.3  记录萌发时间，当菌丝长至 1cm～2cm 时，在菌丝前缘画线作为生长起始线，记录时间。 

4.5.1.2.4  画线后放回培养，当菌丝生长最快的试管即将长满时，在菌丝前缘画终止线，记录时间，
测量起始线与终止线之间的距离，计算菌丝生长速度。 

4.5.1.3  活力评价 

                                                                          3 
DB35/T 1233—2011 

    测定待测菌种3次，每次3个重复，若萌发时间或生长速度比正常菌种延长2倍以上，判定待测菌种
活力减弱。 

4.5.2  搔菌法检测 

4.5.2.1  实验步骤 

    取待测菌种，按无菌操作要求，用接种铲或接种耙搔除菌种表面（母种斜面、原种或栽培种瓶袋料
面）一薄层培养基，塞回棉花塞，放于适宜的温度下培养，观察其萌发出新菌丝的能力。 

4.5.2.2  活力评价 

    按本标准4.4.3进行。